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明膠蛋白胨使用有講究！關(guān)鍵細(xì)節(jié)沒搞懂，效果可能打折扣
發(fā)布時間： 2026-06-27 點(diǎn)擊次數(shù)： 104次明膠蛋白胨是胰酶消化動物明膠所得的蛋白胨，胱氨酸和色氨酸含量低，甘氨酸和脯氨酸含量高，且不含有可發(fā)酵的碳水化合物，營養(yǎng)較低。比較適合于糖醇發(fā)酵中提供氮源和制備低營養(yǎng)培養(yǎng)基。本品為淡黃色至類白色粉末。蛋白胨是動物蛋白為基質(zhì)，經(jīng)過消化、過濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。營養(yǎng)豐富可做多種培養(yǎng)基的原材料。在當(dāng)中它起的主要作用是提供氮源。細(xì)菌學(xué)蛋白胨含有豐富的蛋白多肽、低肽、氨基酸成分和礦物質(zhì)。由于用蛋白為原料以及特定的媒介條件，使其含有豐富的色氨酸、脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸、賴氨酸。這些氨基酸是細(xì)菌生長所需的重要成分和生長因子。明膠蛋白胨在使用方面的注意事項：一、稱量與配液前操作防潮快速稱量本品吸濕性強(qiáng)，陰雨天、高濕環(huán)境盡量不開蓋稱量，操作縮短時長；大包裝建議提前干燥分裝小瓶，減少反復(fù)開蓋進(jìn)水汽。結(jié)塊輕微且無霉變、無異味可研磨后使用；板結(jié)發(fā)硬、發(fā)黃發(fā)黏、有酸味霉味直接廢棄。水質(zhì)選擇配制培養(yǎng)基優(yōu)先使用純化水/蒸餾水，不可用自來水（鈣鎂離子、余氯會影響微生物生長）；水質(zhì)偏硬可少量添加緩沖鹽穩(wěn)定pH。溶解操作要點(diǎn)粉末緩慢撒入水中，邊攪拌邊加熱（小火），溫度40~60℃即可快速溶解，不要一次性大量倒入，防止抱團(tuán)糊底；不可高溫久煮，長時間煮沸會破壞氨基酸，降低營養(yǎng)效果。二、pH調(diào)節(jié)與滅菌關(guān)鍵pH控制明膠蛋白胨水溶液本身偏弱酸性，多數(shù)細(xì)菌培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)pH 7.0~7.2；滅菌前用1mol/L NaOH或HCl微調(diào)，滅菌后pH會下降0.1~0.3，調(diào)pH時預(yù)留差值。滅菌規(guī)范常規(guī)采用121℃、0.1MPa、15min高壓蒸汽滅菌；含高濃度明膠蛋白胨培養(yǎng)基，滅菌時間不宜延長，過長高溫會造成蛋白分解、培養(yǎng)基發(fā)黑、營養(yǎng)失效；若搭配明膠做低溫凝固培養(yǎng)基，滅菌后水浴降溫至45~50℃再倒平板，溫度過高會殺死熱敏菌。禁止反復(fù)滅菌培養(yǎng)基滅菌一次即可，二次高壓會嚴(yán)重破壞胨中多肽、氨基酸，培養(yǎng)菌液長勢變差。三、培養(yǎng)基配制與應(yīng)用使用適用范圍區(qū)分明膠蛋白胨富含膠原蛋白水解多肽，多用于明膠液化試驗、需氧/厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基、微生物增菌培養(yǎng)；不適用于需要高氮源、維生素豐富的真菌、特殊營養(yǎng)苛求型菌株（建議搭配酵母粉使用）。配比參考常規(guī)基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加量10~20g/L；做明膠生化鑒定培養(yǎng)基需搭配明膠，不可單用明膠蛋白胨。溫度使用限制配制好的明膠培養(yǎng)基使用、培養(yǎng)溫度不可超過30℃，溫度過高明膠無法凝固，無法觀察液化反應(yīng)。四、無菌操作與培養(yǎng)觀察倒平板、分裝試管全程無菌操作，避免雜菌污染；配好未滅菌液體放置不超過2小時，防止雜菌提前繁殖消耗營養(yǎng)。明膠液化試驗培養(yǎng)：20~22℃恒溫培養(yǎng)，切勿37℃培養(yǎng)，高溫導(dǎo)致明膠自然液化，無法判定試驗結(jié)果。若培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁、沉淀、分層，說明胨已變質(zhì)或滅菌過度，不能用于試驗。五、安全防護(hù)操作粉塵防護(hù)稱量時避免粉末飛揚(yáng)，蛋白胨粉塵易刺激呼吸道、眼黏膜，建議佩戴口罩、護(hù)目鏡；若吸入出現(xiàn)咳嗽、鼻腔不適，及時通風(fēng)清水清洗。接觸處理皮膚大量接觸后清水沖洗；不慎r眼，大量流動清水沖洗5~10分鐘，不適及時就醫(yī)。廢棄物處理廢棄干粉、變質(zhì)培養(yǎng)基不可直接倒入下水道，高溫滅菌后按生化垃圾處理，防止滋生微生物污染環(huán)境。六、儲存配套使用禁忌取用后瓶蓋立即擰緊，內(nèi)置干燥劑定期更換；冷藏儲存時，必須恢復(fù)至室溫再開蓋，防止瓶內(nèi)冷凝水結(jié)塊變質(zhì)。不可與強(qiáng)酸、氧化劑、揮發(fā)性消毒試劑同柜存放，揮發(fā)氣體滲入會導(dǎo)致胨氧化酸敗。遵循先進(jìn)先出，開封后干粉室溫6個月、冷藏12個月內(nèi)用完，超期營養(yǎng)成分衰減，試驗結(jié)果偏差大。
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